E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elanskis
Oomycete Fitoftora infestanai (Mont) de Bary sukelia vėlyvą marą - pavojingą bulvių ir pomidorų ligą. Vienas iš pagrindinių pirminio inokuliacijos šaltinių P. infestans yra storasienės poilsio reprodukcinės struktūros - oosporos.
Hibridinės oosporos, susidariusios sukryžminus genetiškai skirtingas tėvų padermes, prisideda prie populiacijos genotipinės įvairovės padidėjimo, dėl ko pagreitėja padermių prisitaikymo prie naujų veislių ir naudojamų fungicidų procesas.
Oospore formavimas P. infestans šioje srityje buvo pastebėta daugelyje pasaulio šalių: Rusijoje (Smirnov et al., 1999), Norvegijoje (Hermansen ir kt., 2002), Švedijoje (Strömberg ir kt., 2001), Nyderlanduose (Kessel ir kt., 2002) ir kt. regionuose. Oosporos sugeba daugiau kaip 2 metus išgyventi gyvybingos būklės dirvožemyje (Bødker et al., 2006) ir po žiemojimo sukelia augalų infekciją (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Anksčiau buvo įrodyta, kad skirtingų lygių bulvių krūmo augalų lapų atsparumas vėlyvam pūtimui skiriasi; jis padidėja nuo apatinių lapų iki viršutinių. Ši tendencija nepriklauso nuo lapų amžiaus, augalų amžiaus ar bulvių veislės (Vesper ir kt., 2003). Tuo pačiu metu literatūroje mums nepavyko rasti duomenų apie skirtingų bulvių krūmo sluoksnių lapų oosporos susidarymo intensyvumo skirtumus. Tačiau jei tokių skirtumų yra, į juos reikėtų atsižvelgti imant lapų pavyzdžius oosporos formavimosi analizei ir aiškinant kitų autorių gautus rezultatus. Šio darbo tikslas buvo ištirti oosporų susidarymą atsiskyrusiuose skirtingų bulvių augalo sluoksnių lapuose, patalpintose vienodomis sąlygomis drėgnose kamerose.
medžiagos ir metodai
Mes panaudojome 5 izoliatus P. infestans skirtingų tipų poravimosi, išskirto iš paveiktų mėginių, atvežtų iš Maskvos, Riazanės ir Leningrado sričių. Iš jų buvo pasirinktos 3 skirtingų poravimosi rūšių padermių poros, suteikiant gausias oosporas bandant agaro avižų terpėje.
Tyrimams naudojome šių virusų neturinčius bulvių augalus, auginamus šiltnamyje (durpių substrate): ankstyvasis Sandrinas, Zorachka, Uladaras, Oziris, vidurio ankstyvasis Ilyinsky, sezono vidurio Yanka.
Analizei buvo pasirinkti paprasti lapai iš skirtingų bulvių augalo lygių. Trys lapai buvo pasirinkti iš apatinio lygio (4 apatiniai sudėtiniai lapai), trys iš viršaus (3-4 sudėtiniai lapai viršuje) ir trys lapai iš krūmo centro. Paprasti lapai buvo pasverti, nufotografuoti ant koordinatinio popieriaus (kad būtų galima apskaičiuoti tūrį ir plotą), o po to apversti ant sterilaus vandens paviršiaus, supilti 25 ml į Petri lėkšteles. Tada kiekvienas lapas buvo užkrėstas vienu lašeliu mišrios suspensijos tipo zoosporangijų izoliatų A1 ir A2 lašelių. Trims lapams, surinktiems iš kiekvieno lygio, buvo naudojamas trijų skirtingų izoliatų porų sėklos. Vienas lapas buvo užkrėstas vienos poros izoliatų inokuliaciniu mišiniu.
Norint paruošti zoosporangijų suspensiją, skirtingų poravimosi tipų izoliatai 7 dienas buvo auginami ant agaro avižų terpės, po to zoosporangijos buvo nuplaunamos steriliu distiliuotu vandeniu. Inokuliatoriaus koncentracija buvo 5–7 zoosporos mikroskopo matymo lauke, padidinus 80 kartų. Kiekvienas lapas buvo užkrėstas vienu lašeliu mišrios suspensijos zoosporangia izoliatų A1 ir A2 poravimosi tipo.
Visuose eksperimentuose vienam variantui buvo naudojami 3 bulvių lapai. Po 20 dienų inkubavimo 18 ° C temperatūroje kiekvienas lapas homogenizuojamas skiedinyje su 2 ml distiliuoto vandens. Iš gautos suspensijos buvo paimti 3 mėginiai, iš kurių buvo paruošti preparatai mikroskopijai.
Kiekviename variante buvo ištirta 180 regėjimo laukų, po kurių perskaičiuotas oosporų skaičius 1 mm2 lapo paviršius. Buvo apskaičiuoti kiekvieno varianto skaičiavimo rezultatai.
Norėdami apskaičiuoti patikimumo intervalą (μ) reikšmingumo lygiui 0,05, buvo naudojama ši formulė
kur s yra standartinis nuokrypis, n yra matavimų skaičius, t yra t bandymo konstanta esant reikšmingumo lygiui 0,05. Visi skaičiavimai buvo atlikti „Excel“ („Microsoft Office“ paketas).
Rezultatai ir DISKUSIJA
Iš skirtingų bulvių krūmo sluoksnių surinktų ir tomis pačiomis sąlygomis drėgnose kamerose dedamų lapų skiepijimas atskleidė oosporos susidarymo intensyvumo skirtumus. Visose tirtose veislėse didžiausias oosporų skaičius susidarė skiepijant lapus, surinktus iš apatinės ir vidurinės krūmo pakopos. Reikšmingų oosporų formavimosi apatiniame ir viduriniame lapuose nenustatyta.
Mažiausias oosporų skaičius susidarė viršutinio sluoksnio lapuose (1 pav.).
Apatinės ir vidurinės pakopos lapuose maksimalus oosporų skaičius susidarė veislėse Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar ir Oziris. Jie šiek tiek mažiau intensyviai formavosi Yanka veislės lapuose. Didžiausias oosporų skaičius viršutinio sluoksnio lapuose pastebėtas veislės „Uladar“ lapuose, tada Zorachka, Oziris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin ėjo mažėjančia tvarka, tačiau ne visi skirtumai buvo statistiškai reikšmingi.
Paveikslėlis: 1. Oosporų susidarymas skirtingų bulvių krūmo sluoksnių lapuose. Apatiniai yra trijų apatinių krūmo lygių lapai, viršutiniai yra 3-4 kompleksiniai lapai nuo augalo viršaus, viduriniai - nuo krūmo vidurio.
Klaidų juostos rodo patikimumo intervalą, kai reikšmingumo lygis yra 0,05.
Lauke mikroklimatinės sąlygos taip pat prisideda prie oosporų susidarymo apatiniuose ir viduriniuose krūmo lapuose: didesnė drėgmė, sumažėjęs saulės insoliacija ir dienos temperatūros svyravimai (Harrison, 1992). Purškiant viršuje, krūmo apačioje ir centre yra mažiau pesticidų. Norint sumažinti oosporų susidarymą, reikėtų naudoti technologijas, leidžiančias sėkmingai pristatyti fungicidus į apatinę ir vidurinę krūmo dalis. Gerų rezultatų galima pasiekti naudojant turbulentinius oro purkštuvus ir sisteminius fungicidus, kurie gali išplisti į neapdorotas krūmo dalis.
Šį darbą parėmė Rusijos mokslo fondas (projekto Nr. 14-50-00029).
Straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Bulvių apsauga“ (Nr. 2, 2015)