A.I. Polinova, D.R. Zagirova, L.Yu. Kokaeva, I.I. Busko, I.V. Levantsevičius, S.N. Elanskis
Pastaraisiais metais Baltarusijoje bulvių ir sėklų atsargų fitosanitarinė būklė pastebimai pablogėjo. Pasikeitė tam tikrų tipų kenksmingų organizmų vaidmuo ir jų santykis agrofitocenozėse. Padidėjo daugelio ne tik plačiai paplitusių ligų (vėlyvosios pūtimas, alternaria, visų rūšių nuospaudos, bakteriozė, sausasis fuzario puvinys), bet ir naujų, nepakankamai ištirtų, pavyzdžiui, žaizdos vandeningas puvinys, kenksmingumas (1 pav.). Ši liga, pasitaikanti Indijoje, Vidurinėje Azijoje ir kitose pietinėse šalyse, buvo pastebėta Baltarusijos Gomelio, Bresto, Gardino ir Minsko regionuose. Kaip ir kiti dirvožemyje gyvenantys oomicetai, P. ultimum sukelia didžiulę žalą esant per didelei drėgmei - blogai nusausintose vietose, ilgai trunkančių liūčių metu (Taylor et al., 2008).
Baltarusijoje ligos plitimas pastebėtas tais metais, kai buvo padidėjusi vegetacijos temperatūra: kai kuriose bulvių partijose nukentėjo 8–10% gumbų. Gumbų žaizdingas vandeningas puvinys gali padaryti didelę žalą, kurią sukelia atsparių veislių trūkumas, sukurtos apsaugos priemonės ir spartus ligos vystymasis pažeidus gumbus (Zhuromskaya, 2003; Ivanyuk et al., 2005). Liga paveikia tik gumbus. Rusijoje žaizdos vandeningas puvinys dar nėra reikšmingas.
Šiame darbe Baltarusijos nacionalinės mokslų akademijos bulvių ir sodininkystės (Minsko sritis) mokslinio ir praktinio centro saugyklose ištyrėme 4 žaizdinio vandeningojo puvinio sukėlėjų padermes, izoliuotas iš paveiktų Baltarusijos, „Skarb“ ir „Skarb“ veislių bulvių gumbų bei veislinių hibridų. Tyrimo tikslai buvo nustatyti izoliuotų izoliatų rūšis, jų virulentiškumą bulvių gumbų atžvilgiu, įvertinti augimą esant skirtingoms aplinkos temperatūroms ir atsparumą metalaksilui.
Izoliatų grybiena buvo užauginta skystoje žirnių terpėje (180 g šaldytų žaliųjų žirnių 10 minučių buvo verdama 1 litre distiliuoto vandens, po to 30 minučių autoklavuojama esant 1 atm); Iš kiekvienos padermės buvo išskirta DNR. Norint išskirti DNR, sušaldyta grybiena buvo sutrinta skystame azote, lizuota CTAB buferyje ir po to baltymų pašalinta chloroformu. DNR buvo laikoma dejonizuotame vandenyje –20 ° C temperatūroje. Analizė rūšiai būdingų genomo regionų (branduolio ribosomų genų 18S ir 5,8S regionai, taip pat vidinis transkribuotas tarpgeninis tarpiklis ITS1) nukleotidų sekos, sustiprintos naudojant pradmenis ITS1 ir ITS2 (White, 1990), parodė, kad tiriamos padermės priklauso Pythium ultimum Trow rūšims. (sinonimas Globisporangium ultimum (Trow) Uzuhashi, Tojo ir Kakish).
Visos ištirtos padermės paveikė „Gala“ bulvių gumbų riekeles, dedamas į drėgnas kameras. Ant jų susidarė tamsios dėmės, kurios vėliau virto drėgnomis giliai įsiskverbiančiomis opomis (2 pav.). Infekcija buvo atlikta dedant P. ultimum grybieną į gumbų skiltelės centrą.
Inokuliuoti gumbų diskai buvo inkubuojami + 22 ° C temperatūroje. Didžiausias pažeistos srities augimo greitis buvo pastebėtas per pirmąsias 2 dienas, tada opos plotas praktiškai nepakito.
Šis modelis buvo tinkamas visoms tirtoms padermėms.
Štamų augimo greitis buvo įvertintas avižų agaro terpėje 5, 15, 24 ir 34 ° C temperatūroje (3 pav.). Augimas pastebėtas esant bet kokiai temperatūrai; didžiausias augimo greitis buvo pastebėtas 24 ° C temperatūroje (86 mm puodelis per 2 dienas visiškai apaugo). Esant 15 ir 34 ° C temperatūrai, augimo greitis buvo žymiai mažesnis (puodelis peraugo atitinkamai per 4 ir 3 dienas).
15, 24 ir 34 ° C temperatūroje visų tirtų štamų augimo tempai nesiskyrė. Esant 5 ° C temperatūrai, P1 padermė augo daug greičiau nei kiti (20 mm - 4 mm), P4 - šiek tiek lėčiau (10 dieną - 4 mm), P2 ir P3 praktiškai neaugo.
Taip pat reikėtų pažymėti, kad 24 ° C temperatūroje augimas prasidėjo iškart pasodinus ant indo, esant 15 ir 34 ° C temperatūrai, aktyvus augimas vėlavo 1 dieną, o esant 5 ° C - 2 dienoms.
Metalaksilas (ir jo izomeras mefenoksamas) yra pripažinti efektyviausiais vaistais dirvožemio oomicetoms kontroliuoti. Metalaxil sugeba prasiskverbti į gumbus ir užtikrinti (net ir labai mažomis koncentracijomis) ilgalaikę jų apsaugą (Taylor ir kt., 2008, Bruin ir kt., 1982). Tačiau metalaksilo efektyvumas labai sumažėja, kai populiacijose atsiranda atsparių štamų. Keliose JAV regionuose rasta labai atsparių padermių (Taylor ir kt., 2002). Duomenų apie baltarusių P. ultimum padermių atsparumą metalaksilui nėra, todėl šiame darbe buvo nuspręsta išbandyti jų atsparumą vaistui.
Jautrumo fungicidui metalaksilui tyrimas buvo atliktas avižų agaro terpėje, pridėjus skirtingos koncentracijos fungicidą (Pobedinskaya, Elansky, 2014).
Tirtos padermės turėjo tam tikrų atsparumo metalaksilui skirtumų (1 lentelė). Taigi, esant fungicidų koncentracijai 1 mg / l, P4 padermės augimas visiškai sustojo, o likusios padermės labai sulėtėjo. Padermės P1 ir P2 labai lėtai augo terpėje, kurios metalaksilo koncentracija buvo 10 mg / l. Apskaičiuota efektyvioji EC50 koncentracija (fungicido koncentracija, 2 kartus sulėtinanti padermės augimo greitį, palyginti su kontrole) visoms padermėms buvo mažesnė nei 1 mg / l. Taigi visos tirtos padermės buvo jautrios metalaksilui; įrodyta, kad jis labai efektyviai slopina P. ultimum augimą.
Pasak Bruin ir kt. (1982) po augalų vegetacijos apdorojimo metalaksilu 0,5 kg / ha doze, fungicido susikaupimas gumbuose buvo 0,055 μg / g peridermoje, 0,022 μg / g žievės sluoksnyje ir 0,034 μg / g centrinėje gumbo dalyje. Remiantis mūsų duomenimis, šios metalaksilo koncentracijos nepakanka ligai neutralizuoti, tačiau ji gali sulėtinti jos vystymąsi.
Augant avižų terpėje, visos padermės monokultūroje formavo oosporas (4 pav.), Kas būdinga P. ultimum. Poromis sujungus padermes, jokių vegetatyvinio nesuderinamumo simptomų nebuvo - puodeliai buvo tolygiai padengti grybiena.
Gauti duomenys rodo, kad P. ultimum yra fitopatogenas, galintis greitai augti plačiame temperatūros diapazone, įskaitant 5 ° C laikymo temperatūroje. Jis yra virulentiškas bulvių gumbų audiniams ir formuoja oosporas, galinčias ilgai išgyventi. Taigi rūšis yra pavojingas fitopatogenas, galintis kelti grėsmę žemės ūkiui, todėl reikia papildomų tyrimų.
Tyrimas buvo atliktas remiant Rusijos mokslo fondui (projektas N 14-50-00029).
1 lentelė. P. ultimum padermių jautrumas metalaksilui
Padermė | Metalaksilo koncentracija, mg / l | ||
0 (kontrolė) | 1 | 10 | |
P1 | 63 | 6 | 0 |
P2 | 65 | 5 | 0 |
P3 | 59 | 0 | 0 |
P4 | 61 | 0 | 0 |
P1 | 105 | 10 | 3 |
P2 | 110 | 10 | 3 |
P3 | 95 | 0 | 0 |
P4 | 98 | 0 | 0 |
Apytiksliai Pateikti 3 matavimų vidutiniai duomenys.
Straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Bulvių apsauga“ (Nr. 1, 2017)